蛋白分離純化搞不定？請看這里！

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“蛋白質在組織或細胞中一般都是以復雜的混合物形式存在，每種類型的細胞都含有上千種不同的蛋白質。蛋白質分離純化方法已成為目前的研究熱點之一，而蛋白質的分離純化工作較為復雜，需要根據不同的蛋白質制定出相應的策略，采用不同的方法。”

Q:蛋白質分離純化目的

A:設法增加制品純度或比活性，對純化的要**以合理的效率、速度、收率和純度，將需要蛋白質從細胞的全部其他成分特別是不想要的雜蛋白中分離出來，同時仍保留有這種多肽的生物學活性和化學完整性。

蛋白質分離純化方法有哪些？

沉淀法

1、 鹽析

實驗原理：中和蛋白質表面電荷并破壞水化膜。

蛋白質易溶于水，因為其分子的-COOH -NH2和-OH都是親水基團，這些基團與極性水分子相互作用形成水化層，包圍于蛋白質分子周圍形成1~100 nm大小的親水膠體，從而削弱了蛋白質分子之間的作用力。當大量鹽加到蛋白質溶液中，高濃度的鹽離子(如硫酸銨的 SO42- 和NH4+)有很強的水化力，可奪取蛋白質分子的水化層，使之"失水"，于是蛋白質膠粒凝結并沉淀析出。

2、等電點沉淀法

實驗原理：利用蛋白質在等電點時溶解度*低而各種蛋白質又具有不同等電點的特點進行分離的方法。

在等電點時，蛋白質分子以兩性離子形式存在，其分子凈電荷為零(即正負電荷相等)，此時蛋白質分子顆粒在溶液中因沒有相同電荷的相互排斥，分子相互之間的作用力減弱，其顆粒極易碰撞、凝聚而產生沉淀，所以蛋白質在等電點時，其溶解度*小，*易形成沉淀物。

注意點：不同的蛋白質，具有不同的等電點。同一種蛋白質在不同條件下，等電點不同。

3、有機溶劑沉淀法

實驗原理：加入有機溶劑使水溶液的介電常數降低，因而增加了兩個相反電荷基團之間的吸引力，促進了蛋白質分子的聚集和沉淀。

有機溶劑引起蛋白質沉淀的另一種解釋認為與鹽析相似，有機溶劑與蛋白質爭奪水化水，致使蛋白質脫除水化膜，而易于聚集形成沉淀。

影響因素：(1)有機溶劑的選擇 (2)溫度的控制 (3)pH值 (4)離子強度

用此法析出的沉淀一般比鹽析法易過濾或離心沉降，分離后的蛋白質沉淀應立即用水或者緩沖液溶解，以達到降低有機溶劑的濃度的目的。此法在血液制品的制備過程中較多使用。

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