超微量分光光度計的常識普及

 超微量分光光度計的常識：
當我們獲得了nano600超微量分光光度計檢測結果后，對光譜的正確分析至關重要。
輸出結果的含義：
 

1. A260nm——核酸最高吸收峰的吸收波長。
2. A280nm——蛋白最高吸收峰的吸收波長。
3. A230nm——是碳水化合物最高吸收峰的吸收波長。
4. A340nm——是基線校準波長，為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。該值應該接近0.0。如果不是，表明溶液中有懸浮物，需要純化樣品。純樣品的A340一般是0。

●A230產生負值主要是由于在很低 DNA 濃度的溶液中的一些其他成分的干擾所導致的。在下一個測定中，需要降低樣品的稀釋度，A230的負值會被校正。
●A260/A280比值可進行核酸樣品純度評估：純DNA的A260/A280比值為1.8，純 RNA的A260/A280比值為2.0。如果比值低，表示受到蛋白（芳香族）或酚類物質的污染，需要純化樣品。
● A260/A230比值可進行核酸樣品純度評估：純 DNA和RNA的A260/A230比值為 1.8 – 2.2。若比值小于1.8表明樣品被碳水化合物（糖類）、鹽類或有機溶劑污染，需要純化樣品。當 260/230<1 時，通常只有兩種情況。一是胍鹽污染，二是蛋白污染。
 
樣本的不同提取方法對檢測的影響: 
● 苯酚/ Trizol萃取——殘留試劑污染可以通過220至240nm之間的異常光譜以及260至280nm區域的偏移來表示。加氯仿離心后取上清的時候千萬不要貪多，那樣就很容易被蛋白污染。
●純化柱提取——殘留胍可能有助于230nm附近的峰值和從230nm到240nm的波谷偏移。
●磁珠法提取——殘余珠可能會導致光散射，并導致異常光譜。
超微量分光光度計的操作注意事項:
 1. A260/A280、A260/A230比值受溶液酸堿度及離子強度的影響，如酸溶液會使A260/A280比值降低，低離子強度和低 pH 溶液會增加 280 nm 處的光吸收值。因此必須確?？瞻讬z測和溶解樣品所用Buffer的離子濃度和pH值一致。
2. 濃度接近2 ng/μl濃度的樣品可能會導致不可靠的260/280和/或260/230的比值。
3. 樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素，由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒，尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在會干擾測試效果。樣品的濃度不能過低，或者過高（超過光度計的測試范圍）。
4. 樣品混合要充分，否則吸光值太低，甚至出現負值；混合液不能存在氣泡，空白液無懸浮物，否則讀數漂移劇烈。樣品混合不均勻會直接導致檢測不確定，重復性低。
5. 樣品檢測上樣量不能太少，必須能夠保證能后連接上下兩根光纖形成光柱，從而使得檢測正常進行。
6. 樣品臺清潔，在檢測前，檢測后以及連續使用儀器30分鐘后均需要對上下接觸樣品的部位用雙蒸水或純水擦拭。
7. 切忌不可用噴壺在樣品臺上噴射，以防液體液體進入儀器內部造成損壞。
8. 切忌不可用洗滌劑或異丙醇清潔基座。
9. 儀器放置位置應當遠離通風口，以免液滴蒸發太快導致濃度讀數偏大。
     
以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結關于超微量分光光度計的一些常識。
 
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