AKTA蛋白純化系統的一般操作

AKTA蛋白純化系統的一般操作：
1、開機
按位于底部平臺前左側的ON/OFF 按鈕，打開色譜系統，然后打開電腦電源。待儀器自檢完畢（CU950上面的3個指示燈完全點亮并不閃爍）。雙擊桌面上UNICORN圖標，進入操作界面。UNICORN的操作界面分為四個窗口（Fig 3）
2、準備工作溶液和樣品
所有的工作溶液和樣品需要經過0.45μm的濾膜過濾，樣品也可高速離心后取上清備用。當緩沖液中含有有機溶劑（如乙腈、甲醇），需在使用前用低頻超聲脫氣10min。
3、清洗及管道準備
首先將A泵的進液管道（A1）放入緩沖液或平衡液中，將B泵的進液管道(B1)放入高鹽溶液中，在system control窗口點擊工具欄內的manual，選擇 pump→pump wash explorer，選中A1,B1管道為ON， execute。泵清洗將自動結束。(Fig 4)

                                                                    Fig 4、AKTA Explorer的泵清洗操作
4、安裝層析柱
在manual里選擇pump→flow rate，輸入一定的低流速（Fig 5），insert；選擇Alarm&mon→alarm pressure，設置high alarm（輸入填料或層析柱的耐受壓力，以較低者為設置值，具體可在填料說明書或層析柱說明書中查到），insert，execute（Fig 6） 。待InjectionValve的1號位管道流出水后接入柱子的柱頭，稍微擰緊后將柱下端的堵頭卸掉接入管道連上紫外流動池。

                                                                      Fig 5、AKTA Explorer的流速設定操作


                                                                  Fig 6、AKTA Explorer的限壓設定操作
5、開始純化：
1）在柱子平衡好之后（電導，pH的數值和變化趨勢穩定）即開始上樣了。此時應將紫外調零（Fig 7），選擇Alarm&mon→autozero，exectue。

                                                                  Fig 7、AKTA Explorer的紫外調零操作
2）具體上樣方式：AKTA系統的上樣方式比較靈活，可以根據具體樣品的條件進行上樣，包括用樣品環上樣、用系統泵上樣、用樣品泵上樣等，這里以用系統泵上樣為例簡單介紹上樣過程。點擊pause，將A1放入樣品中，點擊countine，待樣品上完后，再將A1放入到平衡液中繼續清洗柱子。
3）洗脫：上樣后用緩沖液盡量將穿透峰洗回基線。在manual里選擇pump→gradient，
按照自己的工藝選擇targetB（100％）和length（10CV）（Fig 8）。

                                                                    Fig 8、AKTA Explorer的洗脫條件設定操作
4）設定收集：選擇Frac→fractionation_900,輸入每管收集體積，exectue（Fig 9）。結束固定體積收集選擇Frac→fractionation_stop_900，exectue（Fig 10）

                                                                   Fig 9、AKTA Explorer的組分收集設定操作


                                                                   Fig 10、AKTA Explorer的組分收集停止設定操作
5）清洗泵及卸下層析柱：
將A1和B1入口放入純水中，啟動pump wash purifier功能沖洗A泵和B泵及整個管路。然后再將A1和B1入口放入20％乙醇中，同樣操作將乙醇沖滿整個管路保存。再給柱子一個慢流速，設置系統保護壓力，然后先拆柱子的下端，正在滴水的時候將堵頭擰上，再拆柱子的上端，再擰上上端的堵頭。整個過程中應防止氣泡進入。
6）關閉電源：
從軟件控制系統的開始一個窗口unicorn manager點擊退出，其他窗口不能單獨關閉。然后關閉AKTA主機電源，關閉電腦電源。

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